（一（yī））原理及（jí）適用範圍

將乳糖膽鹽選擇性培養基和TTC顯色劑加載在紙片上，經培養後能夠在紙片上生長並發酵乳糖產酸的即為大腸菌群（qún）陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據大腸（cháng）菌（jun1）群MPN表（biǎo）查出相應的（de）大腸菌群（qún）數。食品大腸菌（jun1）群（qún）檢驗（yàn）紙片（piàn）法與國標法中的（de）九管法相對應，將原來幾步（bù）的試驗簡（jiǎn）化為一步，時間由78h縮短為24h以內，省去了製備培（péi）養基、消和培養器皿的清洗（xǐ）處理等大量（liàng）輔助性工（gōng）作（zuò），隨時可以打開包裝（zhuāng）進行抽樣檢測。執行標準：食品（pǐn）安全國（guó）家標準食品微生物檢驗大（dà）腸（cháng）菌群計數MPN計數法（GB 4789.3）。

適用於各類食品、飲料等樣品（pǐn）中大腸菌群的快速測定。

（二）操作方（fāng）法

樣品處理：

按無菌操作稱取樣（yàng）品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌磷酸緩衝液稀釋液（或（huò）生理鹽（yán）水）的取樣瓶或均質杯中，經（jīng）充分（fèn）振搖做成1：10的樣品勻液。樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調節。用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含（hán）有9mL稀釋液的試管內，振搖試管製成1：100的樣品勻液。根據對樣品汙染狀（zhuàng）況的估計，按上述操作，一次製成10倍遞增係（xì）列稀釋（shì）樣品勻液。每遞增（zēng）稀釋1次，換一支1mL無菌吸管或（huò）吸頭（tóu）。從製備樣品（pǐn）勻液至樣品（pǐn）接種（zhǒng）完畢，全過程不得超過15min。

接種：

選取兩個稀釋度進（jìn）行接種，普通食品一般采用1：10和1：100這（zhè）兩個稀釋度，飲料采用（yòng）原液（yè）和1：10兩個稀釋度。本品每份由三片大紙片（piàn）（接10mL，袋中二片（piàn）疊放算作一大（dà）片），六片（piàn）小紙片（接1mL）組成。

用滅菌吸管吸取10mL 1：10樣品勻液加到含有大紙片的（de）塑（sù）料袋中（相當於接樣品1g），吸透後平放，做（zuò）三個重複。再用1mL滅菌吸管吸取1mL同一稀釋度的樣品勻液加到（dào）含有小紙片的塑料袋（dài）中（相當於接樣品0.1g），做三個重（chóng）複。再另取（qǔ）一支1mL滅菌（jun1）吸管吸取1mL 1：100樣品勻液（yè）加到含有小紙片的塑料袋中（相當於接樣品0.01g），做三個重（chóng）複。

培養：

將接種好的紙片（可疊放）放入36℃±1℃培養箱中培養（yǎng）15～24h。

（三）大腸菌群非常可能數（MPN）的報告。

若紙片變黃或在黃色背景上呈現紅色斑點為大腸菌群（qún）陽性紙片。紙片保持紫藍色不變（biàn）或在紫藍色背景上呈現紅色斑點，但周圍（wéi）沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。

記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據《食品飲料（liào）大腸菌群（qún）MPN表》查出相應的大腸菌群數。

如接種的第一個梯度為原液，應將表上查出的結果（guǒ）除以10。

（四）注（zhù）意事項

新的國（guó）家（jiā）標（biāo）準所用的單位改為每克（或毫升）檢樣中大腸（cháng）菌群非常可能數，標準的接（jiē）種量為0.333g（mL），MPN表（biǎo）也（yě）是（shì）由（yóu）此而設計（jì）。而（ér）使用本品的標準接種量為3.33g（mL），大紙片接種10mL 1：10樣品勻液相當於1g樣品，因而表內（nèi）數字應相應降低10倍。飲料樣品的接種量為33.3mL，大紙片接種10mL樣（yàng）品原液，表內（nèi）數字（zì）應降低100倍。

（五）保存條件

本產品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質期為一（yī）年，鋁箔袋打開後,未用完的紙片要放回鋁箔（bó）袋中封好，放到冰箱中，一個月內用完。在高濕（shī）度的環境中可能出現冷凝水，非（fēi）常好在拆封前將整包回溫至室溫。